EMB-agar: grund, förberedelse och användning

EMB-agar är ett selektivt och differentiellt fast odlingsmedium som används för isolering av gramnegativa baciller, huvudsakligen från familjen Enterobacteriaceae och andra icke-krävande gramnegativa baciller. Det är också känt av akronymet EAM, vilket betyder eosin-metylenblå.

Detta medium skapades av Holt-Harris och Teague 1916. Det innehåller pepton, laktos, sackaros, dikaliumfosfat, agar, eosin, metylenblå och vatten. Det liknar MacConkey agar, speciellt om EMB-agar modifierad av Levine används, vilket inte innehåller sackaros.

Faktum är att varje laboratorium bestämmer om det fungerar med den ena eller den andra, eftersom de uppfyller samma funktion, även om de biokemiskt är olika.

Den presenterar till och med samma nackdel som den klassiska MacConkey-agaren när det gäller svavelproduktion av släktet Proteus. För att undvika detta fenomen kan agarkoncentrationen ökas med upp till 5%.

foundation

selektiv

EMB-agar är subtilt selektiv eftersom den innehåller de aniliniska färgerna (eosin och metylenblå), vilka fungerar som inhibitorer, förhindrar tillväxten av de flesta Gram-positiva bakterierna och några krävande Gram-negativa baciller.

Denna agar har emellertid nackdelen att vissa Gram-positiva bakterier kan motstå närvaron av de hämmande substanserna och växa som små, färglösa, punctiforma kolonier, såsom Enterococcus faecalis och någon Staphylococcus .

Du kan också odla vissa jästar, såsom Candida albicans-komplexet, vilket kommer att ge mycket små rosa kolonier. Inkluderat kan chlamydosporer utvecklas från denna jäst om provet såddas med djup.

avvikelsen

Å andra sidan är EMB-agar också ett differentialmedium eftersom dessa färgämnen tillsammans (eosin och metylenblå) har egenskapen att bilda en fällning vid surt pH, därför tjänar de som indikatorer för dess produktion.

Svagt jäsande laktos- eller sackarobakterier producerar därför lila kolonier om 24 till 48 timmar. Till exempel släktet Klebsiella, Enterobacter och Serratia.

De bakterier som starkt fermenterar laktos, såsom Escherichia coli eller sackaros, såsom Yersinia enterocolitica eller Proteus penneri, bildar en grön svart fällning, vilket ger en karakteristisk metallisk glans i dessa arter.

Det bör noteras att om EMB levinmedium (utan sackaros) används, kommer Yersinia enterocolitica och Proteus penneri att producera tydliga kolonier.

Bakterier som inte fermenterar laktos eller sackaros närs av närvaron av peptoner, vilket ger aminosyror och kväve som är nödvändiga för bakteriell utveckling och producerar klara kolonier. Till exempel släkten Salmonella och Shigella, bland andra.

Likaså är det viktigt att notera att släktet Acinetobacter kan presentera kolonier av lavendelblå, även om det inte är en fermentor av laktos eller sackaros, men de har egenskapen att fixera metylenblå i sin cellvägg. Detta kan också hända med andra oxidativa bakterier.

beredning

Det ursprungliga dehydratiserade mediet är ljust beige.

För att framställa detta odlingsmedium bör 36 gram av det dehydratiserade mediet vägas och suspenderas i en flaska innehållande en liter destillerat vatten.

Efter att ha lämnat blandningen i 5 minuter i vila, sätt fiola till en värmekälla, blanda kraftigt och ständigt tills det kokar och det är helt upplöst.

Därefter steriliseras det redan upplösta odlingsmediet med autoklaven vid 121 ° C i 15 minuter.

Vid slutet av tiden avlägsnas den från autoklaven och lämnas för att vila kort. Sedan serveras det till och med varmt (45-50 ° C) mellan 15 och 20 ml agar i varje steril petriskål. Mediet ska vara blått lakmus.

Efter servering lämnas plattorna litet upptäckta tills agaren kyler lite. Därefter täcks de och får solidifiera helt. Senare beställs de i en inverterad plåthållare och förvaras i kylskåp (8 ° C) tills användning.

Denna procedur utförs företrädesvis i en laminärflödeskåpa eller framför Bunsen-brännaren för att undvika förorening.

Det är viktigt att komma ihåg att varje kommersiellt hus anger vilket belopp som ska vägas för att förbereda kulturmediet.

Det slutliga pH-värdet i mediet bör vara 7, 2 ± 0, 2

tillämpningar

Detta medium används för att så urin och avföring eller någon typ av kliniska prov, särskilt om förekomsten av icke-krävande gramnegativa baciller är misstänkt, såsom baciller som tillhör familjen Enterobacteriaceae, som växer mycket bra i detta medium.

De enteropatogena bakterierna i släkten Shigella och Salmonella utmärks av sina färglösa eller lite gula kolonier.

Andra icke-fermenterande laktosbaciller växer också, bland annat Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter.

På samma sätt är detta medium mycket användbart vid mikrobiologisk analys av mat och vatten, eftersom det är idealiskt för den fullständiga bekräftande fasen för bestämning av koliformer, det vill säga att bekräfta närvaron av E. coli från grumliga EG-buljonger från av den mest sannolika taltekniken (NMP).

Kvalitetskontroll

För att verifiera att det nyberedda odlingsmediet fungerar bra kan kontrollstammar planteras för att observera koloniernas egenskaper och verifiera att de överensstämmer som förväntat.

För detta kan ATCC-stammar eller väl identifierade stammar av E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa och vissa Gram-positiva bakterier, såsom S. aureus, användas .

Det förväntas att E. coli kommer att generera välutvecklade blå-svarta kolonier med grön metallisk glans. Medan Enterobacter aerogenes och Klebsiella sp måste ge välutvecklade blåsvarta mukösa kolonier.

Å andra sidan, Salmonella typhimurium och Shigella flexneri, måste utveckla stora kolonier, färglösa eller med en liten gul färg.

Slutligen växer släktet Pseudomonas aeruginosa som färglösa kolonier av oregelbunden storlek, medan Gram-positiva bakterier ska hämmas fullständigt eller växa sparsamt med mycket små kolonier.

Slutliga överväganden

Ibland medför steriliseringen metylenblå att minska, observera ett orange medium. För att metylenblått ska oxidera och den lila färgen ska återvinna, måste den blandas försiktigt tills färgen återhämtar sig.

Efter steriliseringen kan färgen också fälla ut, så det måste blandas väl innan du serverar petriskålarna.