Kinyoun färgning: grund och tekniker

Kinyoun-färgning är en färgningsteknik som används för att fläcka bakterier och syrafasta parasiter. Det föddes från modifieringen av färgningen av Ziehl-Neelsen; Båda teknikerna tolkas på samma sätt men de skiljer sig åt i två delar: vid framställning av huvudreagenset och därmed använder Kinyoun-tekniken inte värme.

Av denna anledning är det också känt som kallmodifierad Ziehl-Neelsen eller Kinyoun kallfärgning. Det indikeras för färgning av Mycobacterium tuberculosis, Micobacterium leprae, atypiska mykobakterier, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris och Cyclosporas cayetanensis .

Det är värt att notera att Nocardias fläckar svagt med denna teknik eftersom de är delvis syrabeständig alkohol, så för denna genre finns en modifiering av metoden.

I sin tur har Kinyouns kalla teknik kombinerats med trichrometeknik modifierad av Didier för detektering av coccidia ( Criptosporidium parvum och Isospora belli ) och sporer av mikrosproridier ( Enterocytozoon bieneusi och Encephalitozoon intestinalis ).

foundation

Huvudfärgningsreagenset är karbolfuchsin eller fenicainfuchsin, som har egenskapen att binda till karbonsyrorna i den vaxartade cellväggen, rik på lipider (mykolsyra) av mykobakterier och vissa parasiter.

Den fackföreningen motverkas inte av syraavfärgning; Därför definieras mikroorganismer som syrabeständig alkohol.

Till skillnad från Ziehl-Neelsen-tekniken - som fixar färgen genom värme - i Kinyoun-tekniken är detta steg inte nödvändigt eftersom fenol-fuchsinlösningen som framställts för denna teknik innehåller en hög koncentration av fenol.

Fenol löser lipidmaterialet i cellväggen, vilket möjliggör införandet av Carbol Fuchsin-färgämnet. Efter det att färgämnet tränger in, förblir det fixerat trots tvätt med alkohol-syra.

På detta sätt tar de syrabeständiga mikroorganismerna den karakteristiska röda färgen, medan allt som inte är syrafast alkohol blir missfärgad och färgad blå.

teknik

material

- Modifierad fenolisk fuchsin.

- Alkoholsyra.

- Methylenblå.

Framställning av Kinyoun-fenikerad fuchsin

- Grundläggande fuchsin: 4 gr.

- fenol: 8 ml

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Destillerat vatten: 100 ml.

Den grundläggande fuchsinen i alkohol måste lösas långsamt, blandas ständigt. Därefter smältes den kristalliserade fenolen i ett vattenbad vid 56 ° C. När en gång lösts tillsätts 8 ml till fuchsinlösningen framställd ovan.

Framställning av alkohol-syra

- Koncentrerad saltsyra: 3 ml.

- Etanol (95%): 97 ml.

Det måste mätas, sammanfogas och blandas.

Framställning av metylenblått kontrastfärg

- Methylenblå: 0, 3 g.

- Destillerat vatten: 100 ml.

Den väger och löser upp.

Kinyoun fläckteknik

1- Förbered ett smet direkt från provet, vilket kan vara sputum, lungvätska, urinsediment, cerebrospinalvätska eller avföring, bland annat; eller från en suspension av mikroorganismer erhållna från rena kolonier odlade i primär odlingsmedium.

2- Fixa smeten med värme.

3- Placera smeten på färgbroen och täck med Kinyouns fenoliska fuchsinreagens beredda. Låt det vila i 3 eller 5 minuter.

4- Tvätta med destillerat vatten.

5- Bleach med syraalkohol i 3 minuter och tvätta igen med destillerat vatten.

6 - Blek igen med sur alkohol i 1 eller 2 minuter tills inget mer färgämne släpas.

7- Tvätta med destillerat vatten och låt avta, placera gliden i vertikal position.

8- Täck förberedelsen med metylenblå och låt den stå i 4 minuter.

9- Tvätta med destillerat vatten och låt lufttorka.

10 - Undersök vid 40X och sedan vid 100X.

Om du vill förbättra och påskynda färgningen av sura fasta mikroorganismer, tillsätt 1 droppe vätmedel (tergitol nr 7) till 30 eller 40 ml Kinyoun-fettsyrafuchsin.

Vissa laboratorier ändrar metylenblått kontrastfärg för ljusgrön eller pikrinsyra; den första ger en grön färg till bakgrunden och den andra genererar en gul färg.

Kinyoun teknik speciell för Nocardias

För att förbättra färgningen av Nocardia-bakterier används en modifiering av Kinyoun-färgning. Tekniken är som följer:

1- Täck smeten med Kinyoun fenol fuchsin i 3 minuter.

2- Tvätta med destillerat vatten.

3- Blush kort med 3% sur alkohol tills inget mer färgämne medföljer.

4- Tvätta igen med destillerat vatten.

5- Täck förberedelsen med metylenblå och låt den stå i 30 sekunder.

6- Tvätta med destillerat vatten och låt lufttorka.

Kombinerad teknik för fenol och trichromic fuchsin modifierad av Didier

Denna teknik rekommenderas för analys av pallprover på jakt efter coccidia och sporer av Microsporidium sp samtidigt. Förfarandet som skall följas är följande:

1- Täck smeten med Kinyoun fenol fuchsin i 10 minuter.

2- Ta bort färgämnet och tvätta med destillerat vatten.

3- blekmedel i 30 sekunder med alkoholklorvätesyra.

4- Tvätta igen med destillerat vatten.

5- Täck smet med trikromösning i 30 minuter vid 37 ° C.

6- Tvätta med destillerat vatten.

7- Avfärgad i 10 sekunder med alkoholättiksyra.

8- Tvätta smeten i 30 sekunder med 95% etanol.

Kvalitetskontroll

Som en positiv kontroll framställs smeten med stammar av Mycobacterium tuberculosis och färgas med de beredda reagenserna för att verifiera att bakterierna tar rätt färg (rödfuksi).

Negativa kontroller kan också användas genom att förbereda utstrykningar med någon stam som inte är sur alkoholbeständig, vilket verifierar att hela provet tar kontrastens färg.

Kinyoun-teknik jämfört med Ziehl-tekniken -Neelsen

Kinyoun-tekniken är enklare eftersom det eliminerar uppvärmningssteget, men den största fördelen är att det förhindrar utsläpp av ångor, högt giftigt och orsakar cancer på lång sikt. Därför är Kinyoun-färgning säkrare för personalen som ansvarar för färgning.

Det är viktigt att ta hänsyn till att det är nödvändigt att ta hand om att reagensen inte kommer i direkt kontakt med huden, eftersom de är frätande och blekmedlet är brandfarligt.

När det gäller nackdelarna indikerar ett negativt smet inte nödvändigtvis att mikroorganismen inte är närvarande. Dessutom kan förekomst av celldetritus orsaka falska positiva effekter, vilket genererar förvirring i diagnosen.

referens

1. Tillämpad klinisk kemi (2016). BK Kinyoun Kit. Finns på: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun fläck och två Coccidia i HIV. Medical Journal MD. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Mikrobiologisk diagnos av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Redaktionell Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. (5: e upplagan). Argentina, Editorial Panamericana SA
5. Wikipedia bidragsgivare. «Kinyoun fläck.» Wikipedia, den fria encyklopedin . Wikipedia, den fria encyklopedin, 8 februari 2018. Web. 5 jan 2019.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Implementering av en färgteknik för samtidig diagnos av Coccidia och Microsporidia. Hygieninstitutet för Republiken Universitetet. Montevideo. Uruguay. Finns på: higiene.edu.uy